qPCR-Effizienz-Rechner
Bestimme die Effizienz Deines qPCR-Assays über die Steigung der Standardkurve.
Steigung der Standardkurve
Gib die Steigung aus der Regression Cq/Ct vs. log10(Konzentration) ein.
Amplifikationseffizienz
MIQE-Richtlinien
Für valide relative Quantifizierungen ($DeltaDelta C_q$) sollten Assays Effizienzen zwischen 90 % und 110 % aufweisen ($R^2 ge 0,99$).
qPCR-Steigung zu Effizienz Umrechnungstabelle
| Steigung der Standardkurve | Effizienz (E) % | Amplifikationsfaktor | MIQE-Qualitätsbeurteilung |
|---|---|---|---|
| -3,10 | 110,2% | 2,10 | Akzeptabel (Obergrenze) |
| -3,32 | 100,1% | 2,00 | Optimal / Ideal (100 %) |
| -3,58 | 90,3% | 1,90 | Akzeptabel (Untergrenze) |
| -3,90 | 80,4% | 1,80 | Ungenügend (Optimierung nötig) |
Berechnungsmethodik & Formeln
Formel des Amplifikationsfaktors
Berechnet den Vervielfältigungsfaktor pro PCR-Zyklus.
Prozentuale Effizienz
Drückt die Effizienz in Prozent aus, wobei 100 % eine Verdopplung pro Zyklus bedeutet.
Häufig gestellte Fragen (FAQ)
Was bedeutet qPCR-Amplifikationseffizienz (E)? ▼
Die qPCR-Effizienz ($E$) gibt an, welcher Anteil der Ziel-DNA pro Zyklus verdoppelt wird. Eine ideale Effizienz von 100 % ($E = 1,0$) bedeutet eine exakte Verdopplung pro Zyklus ($2,0$-fache Vervielfältigung).
Wie wird die qPCR-Effizienz aus der Eichgeraden-Steigung berechnet? ▼
Die Effizienz berechnet sich nach: $E = left(10^{-(1 / text{Steigung)}} - 1right) times 100%$. Die ideale Steigung einer Standardkurve beträgt $-3,322$.
Was bedeuten Effizienzen über 110 % oder unter 90 %? ▼
Effizienzen über 110 % (Steigung $>-3,10$) weisen auf PCR-Inhibitoren bei hoher Konzentration oder unspezifische Amplifikation hin. Effizienzen unter 90 % (Steigung $<-3,58$) deuten auf suboptimales Primer-Design hin.
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