Proteinkonzentrations-Rechner (A280)
Bestimme die Konzentration gereinigter Proteinproben aus der Extinktion bei 280 nm, dem molares Extinktionskoeffizienten und dem Molekulargewicht.
Protein-Spektrophotometrie
Gib Extinktion, Koeffizient, Schichtdicke und Molekulargewicht ein.
Proteinkonzentration
* Entspricht 0,271 g/L.
Linearer Messbereich
Achten Sie darauf, dass A280 im Bereich von 0,1 bis 1,5 liegt. Verdünnen Sie Proben bei Werten über 1,5.
Extinktionskoeffizienten gängiger Standardproteine Referenztabelle
| Standardprotein / Antikörper | MW (kDa) | A280 bei 0,1% (1 mg/mL) | Molarer Extinktionskoeffizient ε (M⁻¹ cm⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Rinderserumalbumin (BSA) | 66,4 kDa | 0,667 AU | 43.824 M⁻¹ cm⁻¹ |
| Humanes Immunglobulin G (IgG) | 150,0 kDa | 1,370 AU | 210.000 M⁻¹ cm⁻¹ |
| Lysozym (Hühnereieiweiß) | 14,3 kDa | 2,640 AU | 37.750 M⁻¹ cm⁻¹ |
| Ovalbumin | 42,7 kDa | 0,735 AU | 31.390 M⁻¹ cm⁻¹ |
Berechnungsmethodik & Formeln
Lambert-Beer-Molarität
Berechnet die molare Konzentration aus A₂₈₀, molarem Extinktionskoeffizienten ε (M⁻¹ cm⁻¹) und Küvettenschichtdicke L (cm).
Massenkonzentrations-Umrechnung
Rechnet molare Konzentration mit dem Molekulargewicht in kDa in mg/mL um.
Häufig gestellte Fragen (FAQ)
Warum absorbieren Proteine UV-Licht bei 280 nm? ▼
Die UV-Absorption bei 280 nm wird hauptsächlich durch die aromatischen Seitenketten von Tryptophan (Trp) und Tyrosin (Tyr) sowie in geringem Maße durch Disulfidbrücken (Cystin) verursacht.
Wie berechnet man den molaren Extinktionskoeffizienten (ε) aus einer Sequenz? ▼
ε280 (M⁻¹ cm⁻¹) = (N_Trp × 5.500) + (N_Tyr × 1.490) + (N_Cystin × 125), wobei N die Anzahl der jeweiligen Reste in der Proteinkette angibt.
Wann sollten kolormetrische Assays (BCA, Bradford) verwendet werden? ▼
Kolorimetrische Assays sind erforderlich, wenn dem Protein Tryptophan/Tyrosin-Reste fehlen, wenn Puffersubstanzen bei 280 nm absorbieren (z. B. Nukleinsäuren, Triton X-100) oder wenn rohe Zelllysate gemessen werden.
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